
山東富舜新材料科技有限公司
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提高磷酸鈣轉染法效率的共通步驟,目的都是為了避免產生會被細胞內吞、加工失效的大顆粒沉淀。
提高轉染效率的操作有以下這些:
1、將小分子DNA整合在高分子質量基因組DNA上,以大分子作為運載體,能提高轉染效率。
2、測試緩沖液適合的ph,可制備幾批pH范圍為6.90~7.15的HEPES鹽緩沖液,分別測試緩沖效率,找到適pH值。
3、使用轉染促進劑,如甘油、氯喹、其他可購買的轉染促進劑。因為這些試劑對細胞有一定毒性,因此,應針對每種細胞系通過實驗確定轉染促進劑處理的佳時機、時長和強度。
除了這些共通的步驟,不同廠家還會對混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求。有些方法要求只能輕輕攪動,有些建議用移液器溫和吹吸混勻,有些則提倡應緩慢混合。
因此,在使用磷酸鈣轉染時,應針對不同試劑和細胞系,耐心調整實驗參數,才是獲得高轉染效率的關鍵。


磷酸鈣(此處只討論正磷酸鈣)廣泛存在于自然界和生物體內,更是一類常用的生物材料。磷酸鈣家族包含多種物相,然而基于不同的性質,各種物相的體內生物作用和應用方向也有所差異。如脊椎動物的骨骼和牙齒的主要無機成分為羥基磷灰石,但其形成的前驅相被認為是非晶磷酸鈣,中間相為二水合磷酸氫鈣或磷酸八鈣;病理性礦化的成分包括羥基磷灰石、磷酸氫鈣、焦磷酸鈣等;在生物應用方面,羥基磷灰石是常見內植物表面涂層的成分,而高溫燒結的生物陶瓷主要為磷酸三鈣,鈣磷基骨水泥的水化產物常為二水合磷酸氫鈣等。
磷酸鈣的晶相基本都是20世紀之前發現(非晶相發現于上世紀50年代)、20世紀準確表征的,之后再無典型(非摻雜、非取代、只包含Ca、P、O、H)的新晶相報道。此外對于鈣磷摩爾比為1:1的磷酸鈣,目前只見到兩種類型:二水合磷酸氫鈣(brushite, CaHPO4?2H2O,透磷鈣石相,我們戲稱為“大寶”)和無水磷酸氫鈣(monetite,CaHPO4,三斜磷鈣石相,我們稱為“三寶”),而含有一個結晶水的“二寶”晶相至今未曾發現。



馮山霞女士
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